[每周一例]池塘养殖黄颡鱼大量死亡，分离出肺炎克雷伯氏菌

[病例616]广东佛山儒溪镇一黄颡鱼精养池塘，面积8.6亩，平均水深2.5米，7台1.5kW叶轮式增氧机，1台1.5kW水车式增氧机（图1）。2021年6月16日放平均规格550尾/斤的黄颡鱼苗36万尾，放苗后一直有零星死鱼，少时每天损耗几尾，多时每天损耗几十尾。截止9月底，平均规格达13尾/斤，增氧机白天开6～7台，晚上全开，一天投喂3餐，共9～10包料。
      
9月7日，白撞雨，死鱼10多尾。
      
9月8日，白撞雨，死鱼100多尾。
      
9月9日，暴雨，死鱼300多尾，鱼吃料变慢，当天投喂3餐，共7～8包料，开始内服阿莫西林等抗菌药。
      
9月10-15日，每天死鱼400多尾，内服治疗效果不明显。
      
9月16-24日，每天死鱼500多尾，20日开始内服氟苯尼考、盐酸多西环素等，内服后鱼吃料略有好转。
      
9月25日，死鱼600多尾，外泼消毒剂，内服硫酸新霉素等。
      
9月26-28日，每天死鱼600多尾。
      
9月29日，死鱼450尾，上午客户带6尾鱼上店，观察鱼体表黏液多、腹部膨大、肛门发红（图2），鳃丝无明显异常（图3），镜检未发现有寄生虫，解剖见肝脏充血，脾脏肿大发黑，肾脏肿大充血（图4），肠胃充血、出血（图5），部分鱼脑充血（图6）。从6尾鱼的脑、肝脏和肾脏中接种胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）培养皿进行细菌分离培养，并取鳃、肝脏、脾脏、肾脏组织用95%酒精固定保存做病毒检测。下午4：30到池塘服务，观察下风口有大量蓝藻和死鱼，塘边有少量鱼趴边，用快速水质测试盒检测pH值8.2、亚硝酸盐0.6mg/L，氨氮未检出，海控在手测得溶氧5.23mg/L，水温31.5℃。捞取4尾趴边鱼，其体表和解剖症状同上午6尾鱼相似（图7、8），同样方法对其做细菌分离并取样做病毒检测。
      
结果：采用实验室普通（RT-）PCR检测方法，对采集的10尾鱼的脑、鳃、肝脏、肾脏组织进行肿大病毒属虹彩病毒（RSIV）、蛙虹彩病毒（LMBV）、弹状病毒（SCRV）、神经坏死病毒（VNNV）检测，结果均为阴性（图9）。经28℃培养24h，10尾鱼有9尾的脑、肝脏和肾脏均分离出细菌（图10、11），该菌落呈圆形光滑、边缘整齐、隆起、灰白色，用接种环挑取菌落时易拉成长丝，革兰氏染色观察为阴性短杆菌（图12），经16S rDNA测序初步鉴定为肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella Pneumoniae），药敏试验结果显示该分离菌对“氟多力”敏感（图13）。
      
9月30日-10月10日，每天捞鱼300尾左右。

分析：1、肺炎克雷伯氏菌属于肠杆菌科，广泛存在于人和动物肠道、呼吸道以及水、土壤中，当机体免疫力降低或长期服用抗生素导致菌群失调时易引起发病。文献报道感染该菌引起发病的水生动物有白鲢、鲤鱼、鳗鱼、中华鳖等。
      
2、本案例池塘前期有零星损耗，白撞雨后大量死亡，可能是池塘水质变化大诱发发病且发病周期长。从脑、肝脏、肾脏分离出大量细菌，内服多种抗生素均无明显治疗效果，或许和鱼体质较差、治疗药物配伍不合理或剂量不足等有关。