春季黄颡鱼体表脱粘、溃疡，分离出维氏气单胞菌

【病例597】广东省佛山市儒溪镇一黄颡鱼精养土塘，面积4.5亩，平均水深2.0米，5台1.5kw的叶轮式增氧机（见图1）。2020年7月21日放规格140尾/斤的黄颡鱼10.9万尾到该池塘进行成鱼养殖。一直养殖到2021年2月底，鱼头达4.5两/尾，平均1.2两/尾。放养后该池塘一直有少量死鱼，每天几尾。

                               
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图1  发病池塘



2021年2月19日，池塘出现游水、打转和“开飞机”的病鱼，当日死鱼40多尾，吃料减少。



2月20日，死鱼100多尾。检测病鱼鳃上有大量斜管虫。当晚鱼闭口不再吃料。



2月21日，死鱼100多尾。早上用快速水质测试盒测得水质指标：pH值7.6、亚硝酸盐0.1mg/L、氨氮测不出。当天抽水0.7米，池塘平均水深1.3米左右。外泼4包“激活”抗应激。



2月22日，死鱼近300尾。外泼3桶50斤/桶的甲醛。



2月23日，死鱼700多尾。中午使用4包“激活”做抗应激处理，晚上使用10斤“底加氧”。



2月24日，天气由多云转阴，当天死鱼1200尾左右。上午十点使用一瓶“碧水安5kg”+3包“激活”解毒抗应激。下午四点外泼“银翘板蓝根”5包+“营养快线”3包+“LY-生命素”3瓶。



2月25日，阴转小雨，早上死鱼800多尾。下午4点半到该养殖池塘现场调查，池塘水温22.6℃，用快速水质测试盒测定水质指标：pH值8.0、亚硝酸盐0.1mg/L，氨氮测不出。海控在手溶氧仪测定溶解氧7.30mg/L。观察塘中有“开飞机”环游、头朝上，尾朝下打转的病鱼；塘边也有少量趴边的病鱼。从塘中捞5尾病鱼，外观病鱼体表脱粘、溃烂，头部塌陷、溃烂（见图2、图3）。解剖病鱼鳃无明显病变（见图4）；肝脏充血，脾脏发黑，肾脏充血、肿大，肠道无食（见图5）。分别从5尾病鱼的肝脏和肾脏中接种胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）培养皿进行细菌分离培养，并取鳃、肝脏、脾脏、肾脏组织分别用95%酒精和10%的甲醛固定保存，带回公司研究所进行病毒检测和组织病理切片观察。

                               
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图2  从塘中捞起的5尾病鱼

                               
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图3  病鱼体表脱粘、溃烂

                               
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图4  病鱼鳃无明显病变

                               
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图5  肝脏充血，脾脏发黑，肾脏充血、肿大，肠道无食



采用实验室普通（RT-）PCR检测方法，对采集的4尾病鱼的脑、鳃、肝脏、肾脏组织进行肿大病毒属虹彩病毒（RSIV）、蛙虹彩病毒（LMBV）、弹状病毒（SCRV）、神经坏死病毒（VNNV）、草鱼出血病病毒（GCRV）检测，结果均为阴性。经28℃培养48h，5尾病鱼中有的鱼肝脏和肾脏中分离出圆形光滑、边缘整齐、隆起、不透明、灰白色的菌落（见图6）。将第5尾鱼的肝脏分离菌纯化并鉴定，革兰氏染色为阴性的短杆菌，两端钝圆、散在（见图7），经过16S rDNA测序鉴定为维氏气单胞菌（Aeromonas veronii），对该菌的气溶素基因进行检测，结果呈阳性。药敏试验结果显示该分离菌对“出败康”、“肠苷康”敏感（见图8）。组织病理切片结果显示：病鱼鳃较正常，肝脏组织淤血，细胞颗粒变性，脾脏轻微淤血，组织有些稀疏，肾组织淤血、出血（见图9）。

                               
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图6 采集的2尾病鱼细菌分离培养结果

                               
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图7 分离菌的革兰氏染色结果

                               
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图8 分离菌的药敏试验结果

                               
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图9 组织病理切片结果



2月26日，小雨，死鱼700尾。



2月27日，阴转多云，死鱼500尾左右。中午外泼“银翘板蓝根”5包+“营养快线”5包+“LY-生命素1kg”半包。



2月28日，多云，死鱼270尾左右。中午外泼“银翘板蓝根”5包+“营养快线”5包+“LY-生命素1kg”半包，晚上开始吃料七八斤。



3月1日，死鱼150尾左右。内服“肝胆易康”1包+“营养快线”1包。晚上投喂20斤料。




分 析 ：

1、近年春季黄颡鱼发病严重，多数池塘出现大量死亡，本案例从发病鱼分离出维氏气单胞菌，检测气溶素基因呈阳性，气溶素是重要的毒力因子，该毒素具有溶血性、肠毒性和细胞毒性，与气单胞菌的毒力密切相关，本案例黄颡鱼大量死亡可能与该菌有关。



2、本病例发病黄颡鱼具有水体中“打转”和头部红肿、溃疡的症状，又在较低温度下发病，不排除本病例黄颡鱼也感染了爱德华菌，但当时没有对脑部进行细菌分离，无法确定。 （利洋公司研究所一室：雷燕；利洋水产药店儒溪店：莫福昌、宁科庆 提供 2021.6.17）

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