南美白对虾肌肉白浊检出传染性肌肉坏死病毒

【病例672】福建漳州西埔一大棚水泥池养殖南美白对虾（图1），养殖54口池，单个池塘面积为36m²，池塘水深0.9m，共用2台15kW鼓风机，24h不停换气。养殖水源为海湾河道的海水，水体盐度为30‰，抽水入蓄水池后经消毒、水塔过滤等处理后再使用。2020年9月24日放南美白对虾苗1.6万尾/口池。

                               
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图1  大棚养殖池塘全貌



10月24日发现部分池塘有对虾出现肌肉白浊症状，1-2天后出现偷死，9-13天内为死亡高峰期。



12月12日，大部分池塘已经好转，吃料基本正常，3餐/天，整个大棚共投喂90斤/餐。但还有一口塘发病严重（图2），期间外泼过中草药类产品，效果不明显，目前每天死虾几十尾，对虾规格6～8cm/尾，池塘水温24-25℃，用水质简易测试盒测得pH值8.2，氨氮0.2mg/L，亚硝酸盐0.4mg/L，有少量虾游水，取5尾游水虾观察，肠道有料，肌肉出现不同程度白浊（图3、4），大部分腹部末端体节肌肉出现白浊，头胸甲不易剥离，池塘边上见1尾死虾肌肉有“烤焦”状（图5）。接种5尾对虾肝胰腺和肠道到TCBS培养基做细菌分离，病虾用95%酒精固定带回实验室做病毒检测。

                               
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图2  取样池塘

                               
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图3  发病虾腹部肌肉白浊

                               
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图4  发病虾肌肉白浊

                               
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图5  死虾肌肉出现“烤焦”状



结 果 ：

接菌的5个培养基中仅1尾虾的肝胰腺和肠道中分离出有效菌落（图6），挑取肝胰腺分离的单个菌落转接到TSA培养基上进行纯化，室温约23℃培养18h形成隆起且边缘整齐、湿润的半透明的小菌落，经观察在油镜下呈椭圆状或短杆状（图7），革兰氏染色阴性，经16S rDNA鉴定为弧菌属。取样的5尾对虾PCR检测：白斑病毒（WSSV）、传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）、肝肠胞虫（EHP）、虾血细胞虹彩病毒（SHIV）和传染性肌肉坏死病毒（IMNV）等5项，结果显示5尾对虾IMNV均为阳性（图8）。病理切片观察发病对虾肝胰腺、肠道、鳃、肌肉、心脏等组织，其中肝胰腺、肠道、鳃等均无明显病变特征，心脏出现心肌颗粒变性，肌肉则观察到较大区域的肌纤维紊乱、断裂、横纹消失甚至干酪样坏死等症状（图9）。

                               
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图6  细菌分离结果

                               
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图7  革兰氏染色结果

                               
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图8  病毒检测结果

                               
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图9  肌肉组织病理切片



12月28日，回访，反映养殖过程中存在对虾偷死、长势较慢等问题。



分 析 ：

1、南美白对虾是传染性肌肉坏死病毒的易感品种，资料报道感染的对虾主要症状为肌肉白浊，表现为对虾腹部体节和尾扇肌肉处出现白色斑块，呈不透明状，严重的外观呈“烤焦”状，伴随严重的偷死现象，发病的最适水温为25-30℃，本案例通过实验室检测结果初步诊断为传染性肌肉坏死病毒感染引起慢性死亡。



2、据当地利洋水产药店反映对虾规格从150尾/斤-20尾/斤均有发病，2020年上半年的发病池塘产量较平均产量低，发病严重的池塘产量仅为平均产量的一半，温度上升期最易发病，下半年发病后排塘率10%左右，水温23℃以下死亡量显著减少。



本文作者：张会军、卢恩秋、惠佳保、孙劲、董伟军

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